PCR

T:  PCR cuantitativo (qPCR) y PCR digital (dPCR) para la detección de huevos de Ascaris Lumbricoides.

O: Demostrar si se pueden utilizar dos técnicas moleculares (qPCR y dPCR) para detectar huevos de A. Lumbricoides, y para ello se desarrollaron dos nuevos protocolos de extracción de ADN.

M: Heces infectadas con A. Lumbricoides

Agua bidestilada sembrada con huevos de A. Lumbricoides

Agua recuperada sembrada con huevos de A. Lumbricoides

A.N: DNA de Ascaris Lumbricoides

G: 
Gen                                                                              Pares de bases
ITS-1 (Localizado entre 18S y 5.8S rRNA genes)                     89 bp

EXT:

L 500ul Solución salina tamponada con fosfato

S Vórtex 30s y centrifugado 14000rpm 10min

P Congelación con nitrógeno líquido, descongelación

PCR: PCR cuantitativo (qPCR) y PCR digital (dPCR)

PASOS: 

qPCR
Ciclos         Temperatura             Tiempo
                         95ºC                     10min
40 ciclos             95ºC                     10s
                         60ºC                     40s
dPCR
Ciclos         Temperatura             Tiempo
                         95ºC                     10min
40 ciclos             60ºC                     2min
                         98ºC                     30s

V: Visualizaciòn directa de huevos de ascaris en agua regenerada

Sensibilidad y especificidad analítica: No tiene

Referencias bibliográficas: 

1. Acosta L. Quantitative PCR and Digital PCR for Detection of Ascaris lumbricoides Eggs [Artículo]. PubMed. 2017 [Citado 09 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28377928