STEM CELLS

Terapia con stem cells en neumonía con Ascaris lumbricoides

Se muestran genes actúan en el parásito adulto para controlar su tasa de envejecimiento. Las células madre pueden modificar la vida útil incluso a medida que avanza el envejecimiento. Los científicos descubrieron que las células madre clave no son las que se convierten en óvulos o espermatozoides, sino sus células hermanas del mismo grupo de células madre, conocidas como "células madre de la línea germinal en proliferación", que se dividen continuamente en los tejidos reproductivos. Ahora sabemos que estas células madre son células maestras de control.

Células madre. Obtenido de:https://www.livingandloving.co.za/pregancy-blogs/10-important-facts-every-parent-know-stem-cells

Referencias bibliográficas: 

1. Kwarteng A. Killing filarial nematode parasites: role of treatment options and host immune response. 2016 [Citado 30 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://idpjournal.biomedcentral.com/articles/10.1186/s40249-016-0183-0
2. University of California. Stem Cells For Eggs And Sperm Also Control Aging In Roundworm. [Citado 30 de noviembre del 2018]. Science Daily. Disponible en: https://www.sciencedaily.com/releases/2002/01/020118075414.htm
3.  Rojas H. Eosinofilia y parasitosis. 2010. [Citado 30 de noviembre del 2018]. Disponible en: http://www.binasss.sa.cr/revistas/rmcc/593/art5.pdf

TRANSGÉNICOS

Transgénicos en Síndrome de Loeffler:

A nivel experimental, utiliza al helminto completo en varios modelos de ratones transgénicos, pero la idea es encontrar las moléculas específicas que secreta el parásito al estar invadido por Ascaris lumbricoides, y generar versiones sintéticas de ellas, y diseñar una nueva estrategia de tratamiento. Se destaca que en presencia de helmintos, el sistema del hospedero genera células que se vuelven supresoras, para contribuir a la presencia del parásito durante un tiempo más prolongado.

Transgénicos

Alimentos transgénicos.Obtenido de: https://www.ecologiaverde.com/por-que-los-alimentos-transgenicos-son-malos-971.html 

Ventajas:

1. Mayor resistencia a las plagas e infecciones.
2. Soporta una mayor cantidad de herbicidas.
3. Podrían desarrollarse con menos necesidad de agua.
4. Alimentos más nutritivos.
5. Mejorar el rendimiento de cultivos. 

Desventajas: 

1. Producción de alergias. 
2. Que los genes se desplacen a cultivos convencionales o especies silvestres relacionadas o que se mezclen los cultivos tradicionales y los modificados genéticamente.
3. Pueden tener efectos negativos contra la salud.
4. Podría afectarse el medio ambiente, y causaría desagrado en ecologistas.
5. Pérdida de biodiversidad, y grandes áreas de cultivo.

Referencias bibliográficas: 

1. Hewitsong JP. Vaccination against helminth parasite infections. 2014. [Citado 28 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24606541
2. Dávila I. Generalidades del tratamiento con anticuerpos monoclonales. 2017. [Citado 28 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.separcontenidos.es/revista/index.php/revista/article/view/257/367
3. Terrazas L. Imitan mecanismo de evasión de parásitos para frontar enfermedades autoinmunes. 2013 [Citado 28 de noviembre del 2018]. Disponible en: http://www.dgcs.unam.mx/boletin/bdboletin/2013_169.html
4. EL PAÍS. La OMS dice que los alimentos transgénicos disponibles son inocuos para la salud. [Citado 28 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://elpais.com/diario/2002/10/28/sociedad/1035759604_850215.html

ADN RECOMBINANTE

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA 

Existe una proteína recombinante en el A. Lumbricoides que representa una única unidad de tipo A para el gen aba-1 y se encontró que se une al retinol (vit A) y a una gama de ac.grasos, incluidos los lípidos farmaco-activos, el ac. lisofosfatídico, el factor activador lisoplaquetario y unión a leucotrienos.

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL 

Gracias a la biotecnología, se obtienen antígenos mediante técnicas de biología molecular. Se producen proteínas recombinantes basándose en el gen de una proteína del parásito. Se planteó la posibilidad de desarrollar vacunas de ADN, y son elaboradas al introducir en un plásmido a los genes que codifican para los antígenos del parásito.

ADN recombinante. Obtenido de: https://www.infobiologia.net/2012/11/adn-recombinante-enzimas-de-restriccion.html

Referencias bibliográficas: 

1. Cruz J. Desarrollo de vacunas contra parásitos. 2017. [Citado 24 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.amc.edu.mx/revistaciencia/images/revista/68_1/PDF/desarrollo_vacunas.pdf
2. Xia Y. The ABA-1 allergen of Ascaris lumbricoides: sequence polymorphism, stage and tissue-specific expression, lipid binding function, and protein biophysical properties. [Citado 24 de noviembre del 2018].Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10726282
3. Nagel K. Principles of Recombinant DNA Technology. 2018. [Citado 24 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-319-98428-5_1

WESTERN BLOT

Identificación de proteínas reactivas para la respuesta IgA anti-Ascaris por inmunodetección

Para la identificación de proteínas antigénicas del A. lumbricoides, estas fueron separadas por electroforesis y transferidas a papel de nitrocelulosa 0,45μm para la identificación del isotipo IgA por Western Blot. Las membranas fueron bloqueadas con PBS-Leche descremada 1% durante 1 h a Tº ambiente, en agitación constante. Las membranas fueron lavadas con PBS-Tween 20 0,1% durante 10 min. Incubadas con un pool de sueros de niños infectados o no, diluidos en PBS-Tween toda la noche en agitación constante. Finalmente, fotografiar las membranas para digitalizarlas.

Western Blot . Obtenido de: https://www.creative-diagnostics.com/The-Basis-of-Western-Blot.htm

Referencias bibliográficas:

1. Cabrera J.Evaluación inmunológica de extractos de Ascaris Lumbricoides para las inmunoglobulinas IgA en el suero de individuos infectados [Artículo]. Scielo. 2014 [Citado 09 de noviembre del 2018]. Disponible en: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0016-35032014000200005
2. National Human Genome Research Institute. Western blot [Web].[Citado 16 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.genome.gov/glossarys/index.cfm?id=207&textonly=true

PCR

T:  PCR cuantitativo (qPCR) y PCR digital (dPCR) para la detección de huevos de Ascaris Lumbricoides.

O: Demostrar si se pueden utilizar dos técnicas moleculares (qPCR y dPCR) para detectar huevos de A. Lumbricoides, y para ello se desarrollaron dos nuevos protocolos de extracción de ADN.

M: Heces infectadas con A. Lumbricoides

Agua bidestilada sembrada con huevos de A. Lumbricoides

Agua recuperada sembrada con huevos de A. Lumbricoides

A.N: DNA de Ascaris Lumbricoides

G: 
Gen                                                                              Pares de bases
ITS-1 (Localizado entre 18S y 5.8S rRNA genes)                     89 bp

EXT:

L 500ul Solución salina tamponada con fosfato

S Vórtex 30s y centrifugado 14000rpm 10min

P Congelación con nitrógeno líquido, descongelación

PCR: PCR cuantitativo (qPCR) y PCR digital (dPCR)

PASOS: 

qPCR
Ciclos         Temperatura             Tiempo
                         95ºC                     10min
40 ciclos             95ºC                     10s
                         60ºC                     40s
dPCR
Ciclos         Temperatura             Tiempo
                         95ºC                     10min
40 ciclos             60ºC                     2min
                         98ºC                     30s

V: Visualizaciòn directa de huevos de ascaris en agua regenerada

Sensibilidad y especificidad analítica: No tiene

Referencias bibliográficas: 

1. Acosta L. Quantitative PCR and Digital PCR for Detection of Ascaris lumbricoides Eggs [Artículo]. PubMed. 2017 [Citado 09 de noviembre del 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28377928

PRUEBA DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA PARA SÍNDROME DE LOEFFLER

Prueba de tamizaje:

Con una sensibilidad del 84% la prueba de ELISA podría ser sugerida como método de tamizaje. Tuvo también una especificidad del 79%, con una eficacia diagnóstica del 81.82%. La prevalencia general de la población estudiada es 24.17% y por provincia: Los Ríos 37.6%, Pichincha 5.4%, Guayas 30.9%, Imbabura 16.0%, Azuay 27.6%. Diversos factores, analizan que el diagnóstico en heces alcanza una sensibilidad de 30% aproximadamente; por esto, ELISA, permiten detectar la infección rápida, estandarizándola con antígeno de A. suum, al poseer estructura antigénica similiar a A. lumbricoides.

Elisa. Obtenido de: https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/elisa-13695

Prueba confirmatoria:

Gracias a Western blot, las proteínas separadas mediante electroforesis fueron transferidas a membranas de nitrocelulosa a 180 mA a temperatura ambiente, bloqueadas con PBS-leche descremada al 1% durante 1 hora a temperatura ambiente.El perfil de proteínas del extracto de huevos de A. lumbricoides en geles de poliacrilamida mostró siete bandas visibles con movilidad relativa de 102, 92, 85, 65, 50, 45 y 30 kDa respectivamente. Se detectaron en el extracto de A. lumbricoides un mínimo de 17 proteínas.

Western blot. Obtenido de: https://www.mybiosource.com/learn/westernblotting

Referencias bibliográficas:

1. Champutiz E. Inmunodiagnóstico de ascariasis humana mediante ELISA indirecto [Artículo]. 2016 [Citado 26 de octubre del 2018]. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/310505120_Inmunodiagnostico_de_ascariasis_humana_mediante_ELISA_indirecto
2. Mayora S. Producción de anticuerpos IgA contra componentes proteicos del huevo de Ascaris lumbricoides en el suero de niños infectados [Artículo]. 2016 [Citado 26 de octubre del 2018]. Disponible en: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1316-71382016000200003